(本中文说明书为翻译稿，仅供参考，应以英文版为准)

货号：3091314 (Sigma-Aldrich : GAGO20)

储存温度：2-8℃

产品描述：

酶作为一种分析工具，在食品、生化和制药工业中得到了广泛的应用。酶的方法是特异性的，可重复的，灵敏的，快速的，因此，是分析目的的理想方法。由于酶的高特异性和敏感性，定量分析可以在很少或没有样品准备的情况下进行^1-5。

本试剂盒用于食品和其它材料中葡萄糖的定量、酶法测定。各种出版物已经报道了在不同的系统和样本上使用该试剂盒，包括果蝇^6-8、牛粪⁹、培养的小鼠肌肉细胞¹⁰、HEPG2细胞¹¹和水生生物¹²。

原理：

• 葡萄糖氧化酶将葡萄糖氧化成葡萄糖酸和过氧化氢。

• 过氧化氢在过氧化物酶的存在下与邻二苯胺反应生成有色产物。

• 氧化的邻二苯胺与硫酸反应生成更稳定的有色产品。

• 在540 nm处测得的粉红色的强度与原始葡萄糖浓度成正比。

试剂盒组成：

1、葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂

• 将未打开的试剂盒试剂保存在2-8℃。每个胶囊包含500单位的葡萄糖氧化酶(黑曲霉)，100单位(purpurogallin units)的过氧化物酶(辣根)和缓冲盐。

• 将胶囊内容物倒入琥珀色的瓶子中。

• 将这些物质溶解在39.2 mL去离子水中。

• 该溶液在2-8℃最多稳定一个月，在-20℃冷冻至少六个月。

• 如果出现浑浊，请丢弃。

2、邻二苯胺试剂

• 将未打开的试剂盒试剂保存在2-8℃。尽量减少曝光。预先称量的小瓶中含有5毫克的邻二苯胺盐酸盐。

• 用1.0 mL的去离子水重新配制邻二苯胺小瓶的内容物。

• 翻转样品瓶几次以溶解。

• 避免将试剂暴露在光线下。

• 溶液在2-8℃下稳定3个月。

3、分析试剂

• 向装有39.2 mL葡萄糖氧化酶/过氧化物酶试剂的琥珀瓶中加入0.8 mL邻二苯胺试剂。

• 将瓶子倒过来几次混合。

• 尽量减少暴露在光线下。

• 溶液在2-8℃下稳定1个月。

• 如果出现浑浊或其他颜色，请丢弃。

4、葡萄糖标准溶液

• D-葡萄糖，在0.1%的苯甲酸中为1.0 mg/mL。

• 该标准可追溯到NIST标准，并提供即用型。

• 在2-8℃稳定至少六个月。

• 如果出现混浊，请丢弃。

必需但未提供试剂：

硫酸，ACS试剂，为18M硫酸试剂。在去离子水中准备6M溶液。

仪器：

1、分光光度计或比色计：可在540nm下测定吸光度。

2、比色皿。

3、试管，18 mm×150 mm

4、移液器：能够准确分配20 μL至2.0 mL的体积。

5、能保持温度在37℃的水浴锅

注意事项和免责声明：

本试剂仅供科研使用，不能用于药品、家庭以及其他用途。有关危险和安全操作规程的信息，请参阅安全数据表。

操作步骤：

样品制备：

液体：

• 用去离子水将样品稀释至葡萄糖浓度为20-80μg/mL。

• 如有必要，对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

• 样品葡萄糖含量较低且颜色较深时，应予以脱色处理。

• 含碳酸或发酵样品，须脱气处理。

固体：

• 称量0.1mg样品。

• 用去离子水提取样品。可以将溶液加热(<75℃)以帮助萃取。

• 用去离子水稀释提取液品至葡萄糖浓度为20-80μg/mL。

• 如有必要，对溶液进行过滤或去蛋白处理以使其澄清。

测定：

方法1：标准曲线中的葡萄糖浓度

1、吸取以下溶液到相应的试管中：

2、计时起点，通过向第一个试管中加入2.0 mL的测定试剂开始反应并混合。在向每个后续试管中添加测定试剂之间，要间隔30至60秒。

3、让每个试管在37℃下反应30分钟。通过在每个试管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的间隔停止反应。小心地将各管彻底混合。

4、在540 nm处测量每个试管对空白试剂的吸光度。

方法2：单一标准品中的葡萄糖浓度

1、吸取以下溶液到相应的试管中：

2、计时起点，通过向第一个试管中加入2.0 mL的测定试剂开始反应并混合。在向每个后续试管中添加测定试剂之间，要间隔30至60秒。

3、让每个试管在37℃下反应30分钟。通过在每个试管中加入2.0 mL的6M硫酸溶液，以30-60秒的间隔停止反应。小心地将各管彻底混合。

4、在540 nm处测量每个试管对空白试剂的吸光度。

结果：

计算方法1：

对于标准品，绘制540 nm处的吸光度(y轴)与葡萄糖的毫克含量(x轴)标准曲线。如果标准曲线不是线性的，则结果将不准确。重复测定。

对于测试，从标准曲线确定葡萄糖毫克数。

将上面确定的毫克葡萄糖乘以样品制备中的稀释倍数。

计算方法2：

将上面确定的毫克葡萄糖乘以样品制备中制备的稀释倍数。

参考文献：

1、Bergmeyer, H.U. and Bernt , E., Methods of Enzymatic Analysis (H.U. Bergmeyer, ed.). Academic Press (New York, NY), 2nd ed., pp. 1205-1212 (1974).

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