过氧化物酶(POD)，已激活

1.11.1.7 ( BRENDA | IUBMB )

供体：过氧化氢氧化还原酶
作为试剂用于与辣根过氧化物酶(HRP)一起标记带有伯氨基的水溶性物质。
容量：足够用于约6 mg IgG。
过氧化物酶(POD)包括一组特定的酶，例如NAD过氧化物酶、NADP过氧化物酶、脂肪酸过氧化物酶和一组来自多种来源的非特定酶。它存在于动物、高等植物和其他生物中。

激活的过氧化物酶(POD)已被用于末端脱氧核糖核苷酸转移酶(TDT)介导的dUTP-地高辛缺口末端标记(TUNEL)染色 和免疫组化。
该酶无需预先活化即可用于标记具有反应性和可反应伯氨基的水溶性物质(例如，肽或蛋白质)，其可与过氧化物酶一起用于不同分析方法中。它特别适用于将抗体(来自兔、小鼠、绵羊和山羊的Ig、Ig Fab和Ig F(ab′)₂片段)与过氧化氢酶耦合。所得的缀合物最适合用于免疫化学检测系统，例如ELISA、免疫组织化学和免疫印迹过程。

过氧化物酶(POD)有助于几种有机化合物的脱氢，例如酚、芳香胺、对苯二酚等。

同工酶：>90％同工酶C(HPLC)
纯度：3.0 - 3.5 (A₄₀₃/A₂₇₅)

稳定剂：产品已经蔗糖稳定。
工作浓度：1：4,000至1：10,000
用于ELISA
工作溶液：溶液的制备，(15至25℃)

1.1 M碳酸钠/碳酸氢钠溶液，pH 9.4
1 M Na₂CO₃：将10.6 g Na₂CO₃ 溶解在80 ml双蒸水中，补足至100 ml。
1 M NaHCO₃：将8.4 g NaHCO₃ 溶解在80 ml双蒸水中，补足至100 ml。
通过添加Na₂CO₃溶液调节NaHCO₃的pH至9.4。

2.100 mM碳酸钠/碳酸氢钠溶液，pH 9.8
用双蒸水稀释10 ml溶液1至100 ml。

3.200 mM硼氢化钠溶液
NB：在使用前制备溶液，并在冰上保持冷却。将8 mg NaBH₄ 溶解于1 ml冷双蒸水中。

4.2 M三乙醇胺溶液，pH 8.0
用3 ml双蒸水稀释2.66 ml三乙醇胺，用25％的HCl调节pH值至8.0，并用双蒸水补足至10 ml。

5.1 M甘氨酸溶液，pH 7.0
将约0.75 g甘氨酸溶于6 ml双蒸水中，用0.1 M NaOH调节pH值至7.0，并用双蒸水补足至10 ml。

6.PBS(磷酸盐缓冲盐水)；甘氨酸；pH值7.4。
10 mM磷酸钾、200 mM NaCl、10 mM甘氨酸、pH 7.5。

• 溶液A(K₂HPO₄)：将4.56 g K₂HPO₄×3 H₂O、23.4 g NaCl和1.5 g甘氨酸溶解于1,500 ml双蒸水中，并用双蒸水补足至2000 ml。
• 溶液B(KH₂PO₄)：将2.72 g KH₂PO₄、23.4 g NaCl和1.5 g甘氨酸溶解于1,500 ml双蒸水中，并用双蒸水补足至2000 ml。
• PBS：在控制pH值的同时，向溶液A中添加足够的溶液B直至pH值为7.4。

7.抗体溶液

每个标记反应需要0.3 ml。所用溶液的IgG浓度为c = 4 mg/ml(3.8-42 mg/ml)。该值对于耦合至关重要，因此对于每个测试都应进行光度检查，并在必要时进行调整：A_{280 nm}，1 cm，1 mg/ml = 1.40。
NB：请勿使用防腐剂(例如叠氮化钠)和稳定剂(例如白蛋白)。

• 免疫球蛋白，无盐，冻干粉末：

称量1.6 mg到合适的容器中，并溶于0.4 ml溶液中。检查其浓度和pH，必要时进行校正。

• 缓冲液中的免疫球蛋白：

不含其他蛋白质或防腐剂的PBS缓冲液：用溶液1将pH调节至9.8，必要时用溶液2稀释以获得浓度为4 mg/ml的IgG。有机盐缓冲液：将免疫球蛋白透析至溶液2中，并用溶液2将浓度调节至4 mg/ml。

溶液的稳定性
溶液1、2、4、5和6在2至8℃下可稳定1周。溶液3和7始终应在使用前进行配制。

储存条件(工作溶液)：重溶后的溶液在2至8℃下可稳定3个月。可以将溶液等分并在-60℃或更低的温度下冷冻，然后在-15至-25℃下保存；该过程可能导致10–20％的活力丧失。

将冻干物溶解于0.5 ml的双蒸水中。溶解后过氧化物酶浓度为16 mg/ml。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

horseradish

100

lyophilized

800 units/mg protein (at 25 ℃ with ABTS and H₂O₂ as substrate (pH 5.0).)

pkg of 8 mg (~40 mg lyophilizate)

Roche

6.0-6.5

wet ice

2-8℃

GHS08

Danger

H317 - H334

P261 - P280 - P284 - P304 + P340 - P333 + P313 - P342 + P311

Resp. Sens. 1 - Skin Sens. 1

11 - Combustible Solids

WGK 1