DIG-High Prime

solution

100

sufficient for 40 labeling reactions

pkg of 160 μL

Roche

Designing Safer Chemicals
Learn more about the Principles of Green Chemistry.

Aligned

dry ice

−20℃

DIG-High Prime是酶和核苷酸的混合物，用于用地高辛-11-dUTP 快速标记随机引物DNA。在此方法中，将随机寡核苷酸的3′-OH末端作为引物，由Klenow聚合酶合成变性DNA的互补DNA链。经一小时孵育或过夜孵育后，得到高产量的DIG 标记探针。
我们致力于为您提供更环保的替代产品，以符合“绿色化学的12项原则”的一项或多项原则要求。该产品设计为更安全的化学品。  DIG系统是灵敏且具有成本效益的方案，可替代放射性标记和放射法检测核酸。有许多已发表论文证明DIG系统的通用性，因此，使用放射性标记不再是标记用于杂交DNA的唯一选择。

热灭活：通过加入 2 μl 0.2 M EDTA(pH8.0)和/或加热至 65℃ 10 分钟来终止反应。

DIG-High Primer标记DNA探针用于多种杂交技术：

• Southern 印迹
• Northern 印迹
• 斑点/狭缝印迹
• 筛选基因文库
• 原位杂交

由于高度特异性和灵敏的检测系统，DIG 标记 DNA 探针可用于 1μg 总人类 DNA中的单拷贝基因检测。对碱不稳定的 DIG-dUTP 中，地高辛部分由碱不稳定酯键与间隔臂连接，这样能够更轻松有效地剥离印迹和重新标记印迹。

DIG-High Prime 保证有效标记：

• 标准反应中 DNA 含量范围为 10ng 至 3μg。
• 不同长度的 DNA，从小的限制性片段到 λ 或粘粒 DNA。
• DNA，超螺旋或线性化。
• 低熔点琼脂糖中的 DNA。

标记效率：
用 1μg 模板进行的标准标记反应在 1 小时后产生 0.8μg 新合成的洋地黄毒苷标记的 DNA，在 + 37℃ 温育 20 小时后产生 2μg。

内容
5x 浓缩的随机引物混合物：1U/ μl Klenow 聚合酶，标记级，1mM dATP，1mM dCTP，1mM dGTP，0.65mM dTTP，0.35mM DIG-11-dUTP，在 50％(v/v)甘油中碱不稳定。

功能测试：
在 1μg 线性化 pBR 328 的标准测定中，1 小时后合成 0.8μg DIG 标记的 DNA，20 小时后合成 2.3μg。当该标记的 DNA 用于以 20ng/ml 的浓度杂交时，通过化学发光，用抗 DIG-碱性磷酸酶缀合物和 CSPD 在斑点印迹或 Southern 印迹上检测 0.03pg 同源 DNA。

根据随机引物标记技术，用 DIG-High Prime 产生 DIG 标记的 DNA 探针。DIG-High Prime 是一种专门开发的反应混合物，含有地高辛-11-dUTP 和随机引物标记所需的所有试剂，包括 Klenow 酶，在优化的 5x 浓缩反应缓冲液(在 50% 甘油中)中预混合。

反应混合物或杂交缓冲液中的 DIG 标记的探针在 -15 至 -25℃ 下可稳定储存超过 12 个月。如果在使用前新鲜变性，它们可以重复使用几次。

检测时间：80 分钟

样品材料

• 至少 100bp 的 DNA 片段
• 线性化质粒，粘粒或 λDNA
• 超螺旋 DNA
• 或最小量的 DNA(10ng)，例如从凝胶或熔融琼脂糖中分离的 DNA 限制片段

注意：为了获得最佳结果，模板 DNA 应该线性化，并且片段长度为 100bp，或更长。如果 DNA 模板 >5kb，在标记前使用 4bp 切口的限制性内切酶进行限制性消化。

仅用于生命科学研究。不可用于诊断。

12 - Non Combustible Liquids

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