一、培养体系问题

1、检查细胞是否存在污染。

(1)如果培养细胞时未添加抗生素，细胞污染则是不可避免的。

①用肉眼和显微镜进行检查。

②如果细胞被污染则要弃掉。

(2)支原体污染不易察觉，因此需要进行定期检测。

(3)检查可能造成污染的途径和原因。

2、检查用于培养细胞的培养基和血清(例如批次厂商是否相同)。

3、如果排除问题与培养基无关，那么可能还是细胞存在问题。

(1)复苏另一支冻存的细胞，与正在培养的细胞进行比较。但是需要注意的是两种细胞的培养应分开，以免在培养之初就产生污染。随后按步骤(2)～(4)的方法做排查。

(2)对传代培养的细胞进行计数，并绘制生长曲线，与前面培养该细胞的资料进行比较，检查是否存在如下改变：

①传代时是否存在接种密度过低的情况。

②细胞传代是否过于频繁。

③传代前细胞平台期是否过长。

(3)是否更换了胰蛋白酶或其他分离剂的批次，检查供应商和批次。

(4)细胞分离过程中是否出现严重损伤细胞的情况：

①胰蛋白酶(或其他消化试剂)的消化时间是否过长。

②消化液的浓度和活性是否过高、过强。

③胰蛋白酶消化时，孵箱温度是否正常。

④吹打消化细胞时是否过于用力。

⑤如果添加了EDTA，那么细胞是否对 EDTA过于敏感。

⑥胰蛋白酶稀释是否正确。

⑦胰蛋白酶消化液是否还在有效期内。

二、检查公用设备和试剂

1、孵箱温度设定不准

a、自动调温器损坏。

b、开关孵箱门过于频繁。

c、孵箱门未关紧。

d、风扇损坏造成散热不均。

2、孵箱湿度不能维持

a、水盘中未加水。

b、孵箱有渗漏。

c、开关孵箱门过于频繁。

d、在培养皿中放置一定量的PBS，每日称重，以检查蒸发率。

3、孵箱的CO₂浓度不准

a、开关孵箱门过于频繁。

b、CO₂控制器出现问题。